Porvair P3使用SPE和蛋白质沉淀技术在96孔板中制备生物样品

Porvair P3使用SPE和蛋白质沉淀技术在96孔板中制备生物样品

问题

    以几种方式解决了从离体样品（例如血液，精液，血清，尿液和脊髓液）中去除不需要的大生物分子，以便对这些样品中的小分子进行定量分析的问题。需要去除的主要干扰成分是蛋白质。这些大分子变得非常粘，并可能损坏分析仪器，尤其是色谱仪。较大的蛋白质堵塞色谱柱中的小孔。

    色谱是生命科学研究中要求定量分析的标准分离方法。可以使用气相色谱仪或液相色谱仪进行。两者都容易受到蛋白质分子的破坏。血清中还存在其他天然存在的物质，这些物质也可能导致分析柱堵塞。这一组称为磷脂（PL），这是脂肪酸的衍生物，可以预期，它们也是相对“粘稠”的。

Porvair sciences解决方案

    Porvair目前提供2种类型的96孔过滤板，用于从最大2 ml的血清样品中去除蛋白质。最简单且经济高效的方法是P3（蛋白质沉淀板），而C18 SPE板则更为复杂。平板和方法的选择取决于所用样品，所需的分析物和所需的灵敏度。

    通常，在P3板上处理的样品适合在HPLC系统的大口径色谱柱上进行分析，而在C18 SPE板上制备的样品则适合于使用毛细管色谱柱进行GC分析。当将这两个系统连接到质谱仪时会出现问题。

    LC-MS现在是一种非常普遍的技术，高分辨率的GC-MS现在可以用于检测血清或血液样品中的低水平代谢物和类药物化合物。但是，在这些水平上，磷脂成为一个更大的问题，一类称为溶血磷脂（LPL）的PL（未被C18二氧化硅去除），这会导致所记录的GC-MS信号出现异常效应。

    LPL引起一种称为离子抑制的现象，其中LPL引起的高背景信号掩盖了分析物产生的真实信号。它既可以升高也可以降低观察到的分析物信号，因此很难进行校正。

    P3板中使用的Protein Crash技术不能去除PL或LPL，但在去除蛋白方面非常有效。它通过使用甲醇或乙腈使蛋白质变性来起作用。蛋白质从溶液中“崩裂”并形成大的粘性小球。它们被捕获在一个开孔结构的过滤器中，在其下方是一个较小的超疏水过滤器，该过滤器将所有液体保留在其上方，直到施加真空以迫使包含目标分析物的液体通过该过滤器并进入下面的收集板。

    传统的固相萃取（SPE）方法使用非常精细的二氧化硅“三明治”，在两个支撑玻璃料之间用长链碳氢化合物（18个碳原子）进行功能化。长碳链具有亲油性，可阻止脂肪酸和球状蛋白的通过。但是，由于电离的磷酸基团而具有高极性的较小的LPL直接通过。除了P3中使用的加载步骤外，SPE板还需要额外的调理和清洗步骤。因此，这更加耗时并且难以自动化。

    在PTL开发的实验板中，将额外的化合物碳酸镧与c18二氧化硅混合。镧系元素与磷酸盐基团牢固结合，因此建议LPL与镧系元素结合。但是，如果无法使用灵敏的GC-MS设备，则不可能量化镧系元素/磷酸盐去除系统的功效。其他镧系元素化合物也可能以更好的效果使用。

如需要SPE固相萃取操作指南请联系：北京亘辰科技有限公司